一种肉豆蔻多糖的乙醇脱色方法

本发明涉及中药活性成分的提取与纯化，具体是一种肉豆蔻多糖的乙醇脱色方法。

背景技术：

1、肉豆蔻(myristica fragrans houtt.)又名豆蔻、肉果、玉果等，为肉豆蔻科肉豆蔻属常绿乔木植物，原产地为印度尼西亚的马鲁古群岛，热带地区广泛种植，中国海南、广东等省也有种植。肉豆蔻主要以种仁种皮入药或食用，是重要的中药和常用调味佳品。肉豆蔻中含有肉豆蔻油、木脂素、多糖等多种功能活性成分，具有抗癌、抗氧化、抑菌、降血糖、降血脂、保肝护肝等多种功能活性，有十分重要的开发应用价值。研究肉豆蔻多糖的脱色工艺是肉豆蔻高附加值利用的基础。

2、一种综合提取茶香精、茶多糖和茶多酚的方法(cn105566402b)，包括如下脱色步骤：(1)将茶原料粉碎后，过80目筛筛分；(2)向筛分得到的茶粉中加入沸腾的蒸馏水，然后通过减压旋蒸提取茶香精粗品，再通过乙醚萃取茶香精粗品、冷冻除冰、吹扫浓缩，得到茶香精，减压旋蒸得到的旋蒸液经过抽滤，再用沸腾的蒸馏水超声处理滤渣，抽滤后合并滤液，离心处理后取上清液减压旋蒸，得到浓缩液；(3)浓缩液冷却至室温后，加入乙醇至浓度为80v/v％以沉淀多糖，5000r/min离心15min得到的沉淀物为粗多糖，用80％乙醇脱色两次，用水复溶后冷冻于燥，得到茶多糖。

3、一种黑色玉米须多糖的提取工艺(cn102504039b)，包括如下脱色步骤：(1)脱色工序采用90％的乙醇脱色(振摇1h，ph为中性，温度为75℃，之后静置2h)与10％过氧化氢脱色(脱色时间为2h，ph为6.5-7.5，温度为55-60℃))联合，各脱一次，所得混合多糖为浅黄色。

4、一种暗褐脉柄牛肝菌多糖的脱色方法(cn117186262a)，包括如下脱色步骤：(1)先用2倍体积95％乙醇将树脂浸泡12h，使其充分溶胀，再用95％乙醇洗脱至流出液与水等体积混合无白色浑浊，再用水洗至流出液无醇味，备用。(2)选用d-101大孔树脂对多糖溶液进行振荡吸附试验，大孔树脂的用量为粗多糖溶液体积的30％～70％，称x g预处理好的人孔树脂置于150ml具塞锥形瓶中，加入20.0ml的ph 5.0～9.0、1mg/ml粗多糖溶液，振荡(40～80℃，120r/min，4～8h)，然后用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，浓缩至20ml。最终的保留率为35.94％，脱色率为37.54％。

5、一种戴氏虫草多糖的脱色方法(cn114292345a)，包括如下脱色步骤：(1)原料预外理:精选戴氏中草发酵菌丝体粉碎后过60目分子筛，得戴氏虫草粗粉，密封冷藏备用；(2)除杂：取戴氏虫草粗粉以料液比1:6的比例加入95％的乙醇浸泡12h，待上层液体清澈后过滤后使乙醇挥发完全，再烘干得到脱脂戴氏虫草粉末；(3)水提：称取一定量的脱脂戴氏虫草粉末，按料液比1:5g/ml的比例加入去离子水85℃水浴提取2h后过滤；(4)浓缩：将过滤液在旋转蒸发仪上浓缩至原体积的1/5；(5)醇沉：取浓缩液加入4倍体积的无水乙醇，醇沉24h后过滤；(6)干燥：用无水乙醇、丙酮依次洗涤沉淀，将沉淀干燥得到戴氏虫草相多糖；(7)复溶：称取一定量干燥的戴氏虫草粗多糖，用去离子水浴解，使溶液中戴氏虫草粗多糖的浓度为5mg/ml；(8)脱色：使用活性炭对溶液进行脱色，每100ml溶液活性炭用量为1.0～1.7g，脱色时间为8～12min，脱色温度为40～55℃，脱色时溶液的ph为3～6。此工艺的脱色率达到88～93％，多糖保留率达到70～75％。

6、现有的多糖脱色方法一般为提取后对水提取液或多糖粉末进行脱色，本方法则是直接对药材粉碎后进行脱色，然后提取多糖，既能提高多糖的保留率，又能提高纯度，并为后续多糖提取、纯化、结构和活性的研究简化了步骤、提高了效率。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种多糖的脱色方法，采用层次分析法结合正交的实验设计，该方法既能提高多糖的保留率，又能提高纯度，步骤如下：

2、(1)取肉豆蔻原药材，洗净，粉碎机粉碎，过筛，干燥至恒重；

3、(2)精密称取肉豆蔻粉末，加入乙醇热回流脱色，抽滤，取滤渣，得到脱色肉豆蔻粉末；

4、(3)称取适量的肉豆蔻粉末，加入石油醚，加热脱脂，抽滤，得到脱色脱脂肉豆蔻粉末；

5、(4)取脱色脱脂的肉豆蔻粉末，加水热回流提取，得到肉豆蔻多糖水提液；

6、(5)将水提液浓缩，加入适量无水乙醇，醇沉过夜，抽滤，将滤渣冷冻干燥，得到脱色肉豆蔻多糖。

7、本发明采用固定三个因素，改变一个因素进行单因素实验，探究乙醇浓度(60、70、80、90、100％)、液料比(3:1、6:1、9:1、12:1、15:1ml/g)、脱色时间(1、1.5、2、2.5、3h)的变化对保留率，脱色率和纯度加权评分的影响，根据单因素实验结果，继续通过正交试验进行优化。

8、优选地，步骤(2)中加入乙醇浓度为60-100％，进一步优选为80％。

9、优选地，步骤(2)中加入乙醇脱色的时间为1.0-3.0h，进一步优选为2.5h。

10、优选地，步骤(2)中加入乙醇脱色的液料比为3:1-15:1ml/g，进一步优选为12:1ml/g。

11、优选地，所述脱色方法具体步骤为：

12、(1)取肉豆蔻原药材，洗净，粉碎机粉碎，过60目筛，60℃干燥至恒重；

13、(2)精密称取肉豆蔻粉末，按液料比12:1ml/g加入80％乙醇，加热至80℃热回流脱色2.5h，抽滤，取滤渣，得到脱色肉豆蔻粉末；

14、(3)称取适量的脱色肉豆蔻粉末，按液料比5:1ml/g加入石油醚，加热至微沸，回流脱脂2h，抽滤取滤渣，得到脱色脱脂肉豆蔻粉末；

15、(4)将脱色脱脂的肉豆蔻粉末按15:1ml/g的液料比加水，80℃回流提取2.5h，得到肉豆蔻多糖水提液；将水提液浓缩至1/4体积，加入适量无水乙醇至酒精浓度为80％，醇沉过夜，抽滤，将滤渣冷冻干燥，得到脱色肉豆蔻多糖。

16、本发明通过层次分析法结合正交试验，对多糖提取率，脱色率和纯度构建评价矩阵，最终得到权重分别为59.07％、33.38％和7.55％，通过权重计算综合评分。以乙醇浓度、液料比、脱色时间为考察因素，综合评分为考察指标，进行l9(34)的正交试验，得到最优脱色工艺为：乙醇浓度80％，液料比12:1ml/g，脱色时间2.5h，在此条件下的综合评分最高。进行三次重复试验，保留率为90.70±2.21％、脱色率为15.08±0.58％、纯度为77.28±1.03％，直接提取的多糖纯度为68.38±1.68％，乙醇脱色法相对提高了13.02％。

17、将最优脱色工艺与活性炭和大孔树脂d101进行对比，乙醇、活性炭、d101的综合评分分别为88.48±1.37、75.12±1.28、85.79±2.95。结果表明，乙醇的脱色效果高于活性炭低于d101，保留率和纯度均高于活性炭和d101，乙醇脱色法具有最高的综合评分，表明该脱色方法效果较好。

18、本发明与现有技术相比，其显著优点为：

19、(1)本技术以乙醇作为脱色剂，不同于一般的脱色工艺对多糖提取液进行脱色，而是利用肉豆蔻中含有醇溶性色素的特点，先进行脱色而后进行提取，起到脱色的效果，提供了一种天然产物多糖脱色的新思路。

20、(2)乙醇脱色能够在提取前将色素及部分影响多糖纯度的杂质去除，多糖损耗较小的。

21、(3)通过层次分析法加权评分，单因素结合正交试验探究乙醇脱色工艺，在保证多糖提取率的前提下，最大程度的进行脱色，该工艺能够提高多糖纯度。

22、(4)与活性炭和大孔吸附树脂d101进行对比，乙醇脱色的方法多糖保留率高于活性炭和d101，脱色率高于活性炭，纯度高于活性炭和d101。