雷特综合征病理状态判定试剂盒及线粒体基因组中包含的基因作为生物标志物的用途的制作方法

本发明涉及一种雷特综合征病理状态判定试剂盒及线粒体基因组中包含的基因作为生物标志物的用途。

背景技术：

1、雷特综合征(rett syndrome，以下也称为“rtt”)是一种由位于x染色体上的mecp2基因突变引起的进行性神经发育障碍。rtt主要发病于女童，她们在出生后半年至一年左右正常成长，但随后表现出自闭症倾向等各种神经系统症状。

2、已知toll样受体(tlr)9与缺乏mecp2基因的rtt模型小鼠的脑内炎症有关(参照非专利文献1)。tlr主要针对微生物感染诱导th1，并与nk细胞等一起参与自然免疫。已知tlr9识别病毒dna及细菌dna的未甲基化cpg基序。在非专利文献2中报道了mecp2基因突变导致线粒体功能下降及在rtt中线粒体功能受损。

3、现有技术文献

4、非专利文献

5、非专利文献1：中嶋秀行、“2019年研究资助报告：经由自身内源性配体的小胶质细胞活化引起的雷特综合征发病机制的阐明及治疗方法的制定”、[线上]、2020年6月1日、npo雷特综合症支援机构、[2020年4月22日检索]、互联网连接<url：https://www.npo-rett.jp/rett_img/rett_zyosei_p/nakashima_hokoku.pdf>

6、非专利文献2：natalya shulyakova等、“mitochondrial dysfunction in thepathogenesis of rett syndrome:implications for mitochondria-targetedtherapies”、frontiers in cellular neuroscience、2017年、11、58

7、非专利文献3：青点目信等、“雷特综合征诊断标准修订版(2010年版)”、雷特综合征诊断指南、大阪大学出版社、2015年3月23日、第21-23页

技术实现思路

1、要解决的技术问题

2、rtt的诊断要件是存在退化的情形及符合所有主要诊断标准和排除诊断标准。主要诊断标准是是否存在手部功能丧失、声音语言交流、步态异常及手部刻板运动(参照非专利文献3)。如上所述，rtt的诊断主要基于行为观察。为了简便地评估rtt病理状态的进展及病理状态的恢复，需要与rtt病理状态相关的生物标志物。

3、本发明是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供能够简便地判定rt t病理状态的雷特综合征病理状态判定试剂盒及线粒体基因组中包含的基因作为生物标志物的用途。

4、解决问题的方案

5、本发明人着眼于线粒体基因组的cpg基序几乎未被甲基化修饰这一点，基于线粒体基因组中包含的基因或其片段作为tlr9的配体发挥功能的假设，进行了潜心研究。结果，获得了通过mecp2表达的抑制或敲除可以在血液等中检测到更多线粒体基因组中包含的基因这一知识，从而完成了本发明。

6、根据本发明第一方面的雷特综合征病理状态判定试剂盒包括检测从对象采集的样本中的线粒体基因组中包含的基因的试剂。

7、所述试剂可以是用于在聚合酶链式反应中扩增作为模板的所述基因的碱基序列的至少一部分的引物、及与由所述聚合酶链式反应扩增的扩增产物的碱基序列的至少一部分杂交的探针。

8、上述根据本发明第一方面的雷特综合征病理状态判定试剂盒，还可以包括示出所述探针与所述扩增产物的碱基序列杂交的标记物质。

9、所述基因可以选自由编码16s核糖体rna的基因、编码细胞色素c氧化酶亚基1的基因、编码细胞色素c氧化酶亚基2的基因、编码细胞色素c氧化酶亚基3的基因、编码细胞色素b的基因、编码nadh脱氢酶1的基因、编码nadh脱氢酶2的基因、编码nadh脱氢酶3的基因、编码na dh脱氢酶4的基因、编码nadh脱氢酶4l的基因、编码nadh脱氢酶5的基因、编码nadh脱氢酶6的基因、编码atp合酶6的基因及编码at p合酶8的基因组成的组。

10、根据本发明第二方面的用途是用于辅助对象的雷特综合征病理状态判定的、线粒体基因组中包含的基因作为生物标志物的用途。

11、发明的效果

12、根据本发明，能够简便地判定雷特综合征的病理状态。

1.一种雷特综合征病理状态判定试剂盒，其中，包括：

2.根据权利要求1所述的雷特综合征病理状态判定试剂盒，其中，

3.根据权利要求2所述的雷特综合征病理状态判定试剂盒，其中，还包括：

4.根据权利要求1至3中的任一项所述的雷特综合征病理状态判定试剂盒，其中，

5.一种用于辅助对象的雷特综合征病理状态判定的、线粒体基因组中包含的基因作为生物标志物的用途。