一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法

1.一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s1.2中，经鉴定，共有4615个差异甲基化的cgcgcgg-cpg，主成分分析显示多数胰腺癌患者与正常对照者可以区分开。

3.根据权利要求2所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s1.3中，具体包括：以正常对照者的血浆测序结果为参考，直接计算每个cpg位点在两组受试者中的不同分布与不同频率判断该甲基化位点是否与疾病诊断关联，经加和阳性法筛选得出120个甲基化位点的甲基化程度可用于胰腺癌的诊断。

4.根据权利要求3所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s1.4中，运用最小绝对收敛和选择算子回归方法选择了14个最优的甲基化位点组成疾病评级模型，并建立疾病评分与分级公式。

5.根据权利要求4所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s1.5中包括：在验证队列中进一步验证上述120个基因甲基化位点对胰腺癌患者和正常受试者的区分效果，通过计算阳性个数和曲线下面积值来评估区分性能。

6.根据权利要求1所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s2.1中包括：每份重约20mg的组织标本用生理盐水清洗后直接冻存于-80℃冰箱中，血液样本要求为至少10ml外周血，必须在6小时内完成离心后将分离的血浆编号归档存于-80℃冰箱。

7.根据权利要求6所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s2.2中包括：组织标本dna提取使用试剂盒a中的1号耗材，血浆游离dna提取使用试剂盒a中的2号耗材；提取的dna需要进行亚硫酸氢盐转换，这一步使用试剂盒a中的3号耗材；文库扩建按照mcta-seq技术流程进行，总共分为三步，第一步pcr反应使用试剂盒b中的primera与试剂盒c中的ne buffer2、klenowfragment，第二步pcr反应使用试剂盒b中的primerb，第三步pcr反应使用试剂盒b中的primer c和primer d。

8.根据权利要求7所述的一种基于甲基化评分和分级的胰腺癌筛查方法，其特征在于：所述s2.3中包括：dna文库测序前需要进行至少3次纯化，此步骤的扩增反应需要使用试剂盒b中的primer q-p1和primer q-p2，扩增产物使用琼脂糖凝胶电泳取180-250bp范围内的条带，琼脂糖凝胶回收与dna清洗纯化需要使用试剂盒a中的5号与4号耗材。