特异性下丘脑POMC神经元SIRT1过表达小鼠模型构建方法及其应用与流程

1.特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：利用crispr/cas9技术，将cag-lsl-msirt1-3-3xflag-wpre-polya基因片段定点插入到小鼠的h11位点；重组后的小鼠的h11位点后的序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，将crispr/cas9体系和同源重组载体显微注射到c57bl/6jgpt小鼠的受精卵中，获得f0代小鼠；经pcr验证正确的f0代阳性小鼠与c57bl/6jgpt小鼠交配获得可稳定遗传的f1代阳性小鼠模型；将f1代小鼠与pomc-cre小鼠交配获得f2代小鼠并对其进行基因鉴定。

3.根据权利要求2所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，构建携带靶位点同源区域及目的片段的同源重组载体；将转录好的sgrna和cas9系统以及纯化后的同源重组载体样品显微注射到c57bl/6jgpt小鼠的受精卵中，获得f0代小鼠。

4.根据权利要求3所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，所述同源重组载体的鉴定引物如下：

5.根据权利要求1所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，sgrna的序列为5′-ctgagccaacagtggtagta-3′。

6.根据权利要求2所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，f0代小鼠的鉴定引物如下：

7.根据权利要求2所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，f1代小鼠的鉴定引物如下：

8.根据权利要求2所述的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型构建方法，其特征在于，f2代小鼠的鉴定引物如下：

9.权利要求1～8任一项所述方法构建的特异性下丘脑pomc神经元sirt1过表达小鼠模型在制备药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物为改善肥胖的药物。