一种基于RPA检测间日疟原虫的引物探针组合、检测试剂盒及应用的制作方法
技术特征：
1.一种基于rpa检测间日疟原虫的引物探针组合，其特征在于：上游引物核苷酸序列如seq id no：1所示，下游引物核苷酸序列如seq id no：2所示，探针的核苷酸序列如seq idno：3所示。
2.根据权利要求1所述的一种基于rpa检测间日疟原虫的引物探针组合，其特征在于：在下游引物5’端修饰biotin，探针的5’端和3’端分别修饰fam、c3 spacer，在距离探针3’端15nt的位置修饰dspacer。
3.一种基于rpa检测间日疟原虫的试剂盒，包括一个检测rpa扩增结果的侧流层析试纸，所述侧流层析试纸包括一个样品垫，所述的样品垫的一端紧密连接于含有胶体金标记探针的胶体金垫的一端，所述的胶体金垫的另外一端与纤维素膜的一端紧密连接，所述的纤维素膜的另外一端紧密连接吸水垫的一端，其特征在于：所述胶体金标记探针是由胶体金标记的可以与下游引物标记的生物素形成受体-配体特异性结合的链霉亲和素探针组成；所述纤维素膜上靠近胶体金探针垫的一端设置一条检测线，由可以与探针标记荧光素特异性结合的抗荧光素抗体组成，在检测线和吸水垫之间的纤维素膜上设置一条质控线，所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针抗链霉亲和素抗体组成。
4.根据权利要求3所述的一种基于rpa检测间日疟原虫的试剂盒，其特征在于：试纸背面设置一个起支撑作用的背板。
5.根据权利要求3所述的一种基于rpa检测间日疟原虫的试剂盒，其特征在于：包括一个rpa反应系统，rpa反应系统由四部分构成，
6.根据权利要求3所述的一种基于rpa检测间日疟原虫的试剂盒，其特征在于rpa扩增反应体系为：取10μm的上、下游引物各2.1μl、10μm的探针0.6μl、再水合缓冲液29.5μl、醋酸镁2.5μl、dna模板2μl、无核酸酶水11.2μl，将上述混合液加入一个含所述的冻干试剂的扩增反应管中。
7.权利要求3所述的一种基于rpa检测间日疟原虫的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
技术总结
本发明公开了一种基于RPA检测间日疟原虫的引物探针组合、检测试剂盒和应用。该组合物包含上游引物、下游引物和探针，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本发明基于RPA检测间日疟原虫的引物探针组合结合侧流层析试纸条检测法，建立了一种间日疟原虫的RPA‑LFD检测方法。本发明具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，能够实现短时间内结果可视，满足现场样本的检测要求；且不需要精密仪器，适合野外快速检测。
技术研发人员：李诗慧,石锋,高春花,丁丹,孙亚萍,危芙蓉,张璟,贾孝凯,王颖,朱慧慧
受保护的技术使用者：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5
技术研发人员：李诗慧,石锋,高春花,丁丹,孙亚萍,危芙蓉,张璟,贾孝凯,王颖,朱慧慧
技术所有人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）
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