一种简单高效的DNA-蛋白质定向偶联模型的构建方法
技术特征:
1.一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,包括:
2.根据权利要求1所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,步骤1具体包括以下内容:
3.根据权利要求2所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,步骤1.1中,采用二硫苏糖醇和2,5-二溴己二酰胺分别对野生型蛋白质突变后的半胱氨酸的侧链基团-ch2-ch2-sh进行还原和转化。
4.根据权利要求3所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,采用二硫苏糖醇进行还原时,二硫苏糖醇用量为100当量,在室温下振荡反应4小时;采用2,5-二溴己二酰胺进行转化时,2,5-二溴己二酰胺用量为100当量,37℃振荡反应4小时。
5.根据权利要求2所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,步骤1.2的催化反应中,bpin、邻苯二酚、ru(bpm)3 cl2的用量分别为1000 当量、100当量、10 当量,在ph7.5的反应体系中,于4℃下催化反应40分钟。
6.根据权利要求2所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,在步骤1.2的bpin的合成中,羟基氨基甲酸叔丁酯与2-(3-溴丙基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷和叔丁醇钾的摩尔比为75:83:225。
7.根据权利要求2所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,步骤1.3具体为:
8.根据权利要求1所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,步骤2具体包括:
9.根据权利要求8所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,3′端带有磷酸-α,β-不饱和醛基团的寡核苷酸与步骤1的产物的摩尔比为1:2。
10.根据权利要求1所述的一种简单高效的dna-蛋白质定向偶联模型的构建方法,其特征在于,所述野生型蛋白质为组蛋白h4。
技术总结
本发明属于化学生物学和药物化学领域,涉及一种简单高效的DNA‑蛋白质定向偶联模型的构建方法。包括:步骤1:将赖氨酸结构类似物定向安装到野生型蛋白质突变得到的半胱氨酸位点上;该野生型蛋白质不含有半胱氨酸或其突变不影响功能,并含有可与DNA形成水解可逆席夫碱型DNA‑蛋白质共价偶联(DPC)的赖氨酸残基;所述半胱氨酸由赖氨酸突变获得。步骤2:将寡核苷酸与步骤1产物通过肟化偶联得到内源性DPC结构类似物。本发明在温和条件下实现了蛋白质的位点选择性赖氨酸结构类似物功能化,构建了水解稳定且与内源性DPC化学结构高度类似的定向偶联模型。该方法步骤简单、反应快速,有助于提高实验效率,减少对实验设备和操作的要求。
技术研发人员:刘阳雪,杨昆,彭莹,王之朔,魏晓滢,陈俊阳,张守涛
受保护的技术使用者:郑州大学
技术研发日:
技术公布日:2024/12/5
技术研发人员:刘阳雪,杨昆,彭莹,王之朔,魏晓滢,陈俊阳,张守涛
技术所有人:郑州大学
备 注:该技术已申请专利,仅供学习研究,如用于商业用途,请联系技术所有人。
声 明 :此信息收集于网络,如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们,我们会在第一时间删除
