一种含微量DNA牛仔裤检材的DNA提取方法与流程

1.一种含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，所述含微量dna牛仔裤检材是2cm×2cm的含微量dna的牛仔裤布片，所述dna消化液300ul～400ul，所述dna消化液包括0.3mol/l～0.6mol/l的盐酸胍、0.2mol/l～0.6mol/l的异硫氰酸胍、4mmol/l～10mmol/l的吐温80、3mmol/l～6mmol/l的edta和20mmol/l～50mmol/l的ph8.4的tris-hcl，所述dna消化液的ph值为7.5～10，所述蛋白酶k溶液15ul～20ul，所述蛋白酶k溶液的浓度为10mg/ml～20mg/ml，所述消化采用37℃～56℃金属浴进行1h～2h，所述离心的速度为12000rpm～13300rpm，所述离心的时间为2min～4min。

3.根据权利要求1所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述dna吸附液300ul～400ul，所述dna吸附液包括5mol/l～7mol/l的异硫氰酸胍、20mmol/l～50mmol/l的ph8.4的tris-hcl和体积百分比为30％～50％的无水乙醇，所述dna吸附液的ph值为3～5，所述壳聚糖衍生物溶液50ul～100ul，所述壳聚糖衍生物溶液中壳聚糖衍生物的浓度为1wt％～3wt％，所述翻转混匀吸附的时间为15min～20min，所述磁珠悬浊液20ul～40ul，所述再次翻转混匀吸附的时间为15min～30min，所述磁吸的时间为2min～4min。

4.根据权利要求1所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述壳聚糖衍生物溶液中的壳聚糖衍生物选自壳聚糖-柠檬酸、壳聚糖-柠檬酸钠、壳聚糖-柠檬酸钾、壳聚糖-柠檬酸锶、壳聚糖-柠檬酸钙、壳聚糖-柠檬酸铝和壳聚糖-柠檬酸镁中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述磁珠悬浊液包括9wt％的尺寸为100nm～2000nm的二氧化硅磁性复合微粒。

6.根据权利要求1所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述洗涤的具体步骤包括：对所述的吸附有dna的磁珠采用洗涤液i进行第一次洗涤和磁吸，吸弃所有液体，采用洗涤液ii进行第二次洗涤和磁吸，吸弃所有液体，采用洗涤液iii进行第三次洗涤和磁吸，吸弃所有液体。

7.根据权利要求6所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述洗涤液i包括2mol/l～4mol/l的异硫氰酸胍、20mmol/l～50mmol/l的ph8.4的tris-hcl、体积百分比为30％～50％的无水乙醇和体积百分比为0.4％～0.8％的非离子洗涤剂，所述洗涤液i的使用量为500ul～700ul，所述洗涤液ii包括3mol/l的nacl、体积百分比为50％的无水乙醇、体积百分比为20％的异丙醇和体积百分比为30％的水，所述洗涤液ii的使用量为700ul～900ul，所述洗涤液iii包括体积百分比为60％的无水乙醇和体积百分比为40％的异丙醇，所述洗涤液iii的使用量为700ul～900ul，所述洗涤采用旋涡混匀15s～30s，所述磁吸的时间为2min～4min。

8.根据权利要求7所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述非离子洗涤剂选自聚乙二醇叔辛基苯基醚、聚乙二醇壬基苯基醚和正辛基谷氨酸中的一种或几种。

9.根据权利要求1所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述洗脱的具体步骤包括：将所述的吸附有dna的磁珠干燥后加水混匀进行溶解，混匀磁吸后得到的液体即为所述dna溶液。

10.根据权利要求9所述的含微量dna牛仔裤检材的dna提取方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述干燥采用55℃金属浴5分钟～10分钟，所述水的用量为20ul～100ul，所述溶解采用55℃金属浴10分钟～25分钟，所述磁吸的时间为2分钟～4分钟。