检测嗜冷黄杆菌的多重PCR引物对组合及其应用的制作方法
技术特征：
1.一种检测嗜冷黄杆菌(flavobacteriumpsychrophilum)的特异性pcr引物对，其特征在于，所述特异性pcr引物对为fp88-f/r、fp995-f/r、fp1024-f/r、fp90-f/r、2fp90-f/r或2fp1022-f/r；
2.一种检测嗜冷黄杆菌的多重pcr引物对组合，其特征在于，所述多重pcr引物对组合为组合①、组合⑥或组合
3.一种如权利要求1所述的特异性pcr引物对在制备嗜冷黄杆菌的pcr检测试剂盒中的应用。
4.一种如权利要求2所述的多重pcr引物对组合在制备嗜冷黄杆菌的多重pcr检测试剂盒中的应用。
5.一种嗜冷黄杆菌的pcr检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的特异性pcr引物对。
6.一种嗜冷黄杆菌的多重pcr检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的多重pcr引物对组合。
7.一种非疾病诊断目的检测嗜冷黄杆菌的pcr方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的pcr方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应体系为：上、下游引物各1μl、2×taq plus pcr master mix 10μl、dna模板2μl和ddh2o 6μl；
9.一种非疾病诊断目的检测嗜冷黄杆菌的多重pcr方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的多重pcr方法，其特征在于，当采用所述组合①进行多重pcr扩增时，所述多重pcr扩增的反应体系为：2×taq plus pcr master mix 10μl，体积比fp88-f/r：fp995-f/r：fp1024-f/r＝1：1：3的引物对组合3μl，dna模板2μl，加ddh2o补足至20μl；所述多重pcr扩增的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸90s，循环扩增35次；72℃延伸10min；
技术总结
本发明公开了检测嗜冷黄杆菌的多重PCR引物对组合及其应用，涉及分子生物学技术领域。本发明首先通过高通量测序技术获得嗜冷黄杆菌全基因组序列，将全基因组序列在NCBI数据库中逐一对比，找到与其他基因组完全不匹配的特异性序列，根据特异性序列设计特异性引物，并通过其他菌株检测引物的特异性，最终筛选到特异性高的引物。之后设计了嗜冷黄杆菌多重PCR引物对组合并利用其进行多重PCR检测，结果显示，本发明设计并筛选得到的多重PCR引物对组合对于检测目标嗜冷黄杆菌具备良好的扩增效果，采用其进行嗜冷黄杆菌检测具有显著特异性和较高的检测灵敏度。
技术研发人员：姜虎成,张思源,赵彦华,刘国兴,孙梦玲,钟立强,薛晖
受保护的技术使用者：江苏省淡水水产研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/12/2
技术研发人员：姜虎成,张思源,赵彦华,刘国兴,孙梦玲,钟立强,薛晖
技术所有人：江苏省淡水水产研究所
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