一种谷草转氨酶检测用干式分析试剂片的制作方法

本发明涉及一种干式分析试剂片，尤其涉及一种谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，属于临床诊断。

背景技术：

1、谷草转氨酶(got)是一种存在于人体各种组织中的酶，其在临床上的主要意义在于评估肝脏的健康状况。当肝脏受到损伤或疾病影响时，大量的got会从肝细胞中释放到血液中，导致血液中got水平升高。因此，测定血液中的got水平是评估肝脏功能和诊断肝病的重要方法。

2、谷草转氨酶临床检测方法分为湿化学法和干化学法，其中湿化学法是常用的分析方法，一次配制试剂可同时对临床大批量样本进行分析，但随着突发应急检验需求的提升，临床对生化分析的报告时间提出了更短的要求，推动了急诊生化检验技术逐渐从传统的湿化学向干式生化发展。相比于常规湿化学分析方法，干化学分析方法具有检测速度快、检测试剂易保存、不需配置任何液体试剂、检测门槛要求低、场合适应性强等优点，根据检验需求可随时随地对零散样本进行个性化项目组合检测，尤其适合急诊、基层诊所、血站、体检机构、检验实验室等场景。

3、目前，常用的干式检测技术分为试纸条和试剂片，试纸条的技术采用浸泡方式，将试纸浸泡在试剂液中，这种技术无法控制药品的加入量，导致检测精度不够，检测多为定性和半定量，不能满足临床检测；而试剂片技术仅设置一层反应层，无法控制反应序列。公开号为cn102288747b的专利公开了一种用于测定谷草转氨酶的试剂条，此方法过程较繁琐，且无法做到高度定量分析，不适合临床检测使用。公开号为us4547460a的专利公开了一种用于测定谷草转氨酶的试剂干片，其扩散层采用有机溶剂体系制备，对环境不友好。公开号为cn114002422a的专利公开了一种用于生化分析的多层膜干化学试剂片，此方法没有设计预反应层，无法控制反应序列，降低检测精度。

技术实现思路

1、本发明为克服现有技术弊端，提供一种谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，在扩散层和反应层之间设置预反应层，使得谷草转氨酶在预反应层进行特异性反应，不受其它层物质的干扰，起到控制反应序列的作用，并且该层能将扩散层与试剂层紧密连接在一起，防止扩散层粉体脱落。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

3、一种谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述干式分析试剂片由上至下依次包括上支持层、扩散层、预反应层、试剂层、支持体和下支持层，所述扩散层、预反应层、试剂层和支持体由上至下依次设置在所述上支持层和下支持层之间的中间位置，所述上支持层和下支持层的两端孔隙处通过中间支持层粘结，所述上支持层和下支持层中间位置分别设置有加样孔和测试孔，所述预反应层上固定的反应物质包括α-酮戊二酸钠、磷酸吡哆醛、天冬氨酸钠、表面活性剂、激活剂、稳定剂、缓冲液和水溶性高分子聚合物，所述试剂层上固定的反应物包括表面活性剂、丙酮酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、过氧化物酶、无色染剂、缓冲液、辅助因子和水溶性高分子聚合物。

4、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述扩散层为各向均性的多孔扩散膜，其孔隙率为50-85％；所述扩散层固定的物质包括聚合物微球、粘合剂和表面活性剂。

5、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述粘合剂为丙烯酸和苯乙烯单体共聚制备的苯丙乳液，其中丙烯酸与苯乙烯的用量比为50：50。

6、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述聚合物微球包括聚苯乙烯、聚(苯乙烯-甲基丙烯酸)、聚(苯乙烯-二乙烯基苯)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚(甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸丁酯)、聚(苯乙烯-丙烯酸丁酯)、聚(甲基苯乙烯-叔丁基苯乙烯-甲基丙烯酸)和聚(苯乙烯-甲基丙烯酸羟乙酯-二乙烯基苯)中的一种。

7、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述预反应层中的水溶性高分子聚合物的组分为聚乙烯吡咯烷酮、琼脂糖、葡聚糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、亲水纤维素衍生物中的一种或多种的混合物；所述试剂层中的水溶性高分子聚合物为明胶。

8、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述激活剂为氯化镁、硫酸镁、氯化钙、硫酸钙中的一种或多种；所述稳定剂为抗坏血酸氧化酶、edta、聚乙二醇、氯化镁、胆酸钠中的一种或多种。

9、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述预反应层和试剂层中的缓冲液的ph值为5.0-9.0，其内含有三(羟甲基)氨基甲烷(tris)、磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸或柠檬酸盐、赖氨酸、n，n-双(2-羟乙基)甘氨酸、n-2-羟乙基哌嗪-n'-2-羟基丙烷-3-磺酸的钠盐或钾盐、n-2-羟乙基哌嗪-n'-3-磺酸的钠盐或钾盐以及与上述任何化合物结合的酸、碱或盐中的一种。

10、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述预反应层中的表面活性剂为对辛基苯氧基聚氧乙烯醚、对壬基苯氧基聚氧乙烯醚、聚氧乙烯月桂醚、triton x-100和tritonx-405中的一种；所述试剂层中的表面活性剂为triton x-100、triton x-102、triton x-165、triton x-305和triton x-405中的一种；所述扩散层中的表面活性剂为triton x-100、triton x-104、烷基酚聚氧乙烯醚和烷基醇酰胺中的一种。

11、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述无色染剂为二芳基咪唑染料、三芳基咪唑染料和联苯胺中的一种；所述辅助因子为黄素腺嘌呤二核苷酸、辅羧化酶中和对乙酰氨基酚的一种或多种。

12、上述谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，所述上支持层、下支持层和中间支持层均为300nm-800nm波长光下的透光率在85％以上的透明塑料基材，包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、聚丙烯及聚乙烯中的一种，其厚度为80-250μm，优选为150-200μm。

13、本发明的有益效果是：

14、本发明在试剂层和扩散层之间增设预反应层，其由水溶性材料及参与反应的化学试剂构成，主要反应物包括α-酮戊二酸钠、磷酸吡哆醛、天冬氨酸钠，这三种是该检测原理中的第一步反应中的反应物，可以单独与谷草转氨酶进行特性行反应，不受其它层物质的干扰，能更好的控制反应序列，且预反应层能够加强扩散层与试剂层的连接，提高检测精度。本发明扩散层不含有有机溶剂，生产制备过程环境友好。本发明试剂片能够均一扩散，测试结果准确度高，适用于临床生化检测。

1.一种谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述干式分析试剂片由上至下依次包括上支持层(1)、扩散层(2)、预反应层(3)、试剂层(4)、支持体(5)和下支持层(6)，所述扩散层(2)、预反应层(3)、试剂层(4)和支持体(5)由上至下依次设置在所述上支持层(1)和下支持层(6)之间的中间位置，所述上支持层(1)和下支持层(6)的两端孔隙处通过中间支持层(7)粘结，所述上支持层(1)和下支持层(6)中间位置分别设置有加样孔(1-1)和测试孔(6-1)，所述预反应层(3)上固定的反应物质包括α-酮戊二酸钠、磷酸吡哆醛、天冬氨酸钠、表面活性剂、激活剂、稳定剂、缓冲液和水溶性高分子聚合物，所述试剂层(4)上固定的反应物包括表面活性剂、丙酮酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、过氧化物酶、无色染剂、缓冲液、辅助因子和水溶性高分子聚合物。

2.根据权利要求1所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述扩散层(2)为各向均性的多孔扩散膜，其孔隙率为50-85％；所述扩散层固定的物质包括聚合物微球、粘合剂和表面活性剂。

3.根据权利要求2所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述粘合剂为丙烯酸和苯乙烯单体共聚制备的苯丙乳液，其中丙烯酸与苯乙烯的用量比为50：50。

4.根据权利要求2所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述聚合物微球包括聚苯乙烯、聚(苯乙烯-甲基丙烯酸)、聚(苯乙烯-二乙烯基苯)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚(甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸丁酯)、聚(苯乙烯-丙烯酸丁酯)、聚(甲基苯乙烯-叔丁基苯乙烯-甲基丙烯酸)和聚(苯乙烯-甲基丙烯酸羟乙酯-二乙烯基苯)中的一种。

5.根据权利要求1所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述预反应层(3)中的水溶性高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮、琼脂糖、葡聚糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、亲水纤维素衍生物中的一种或多种的混合物；所述试剂层(4)中的水溶性高分子聚合物为明胶。

6.根据权利要求1所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述激活剂为氯化镁、硫酸镁、氯化钙、硫酸钙中的一种或多种；所述稳定剂为抗坏血酸氧化酶、edta、聚乙二醇、氯化镁、胆酸钠中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述预反应层(3)和试剂层(4)中的缓冲液的ph值为5.0-9.0，其内含有三(羟甲基)氨基甲烷(tris)、磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸或柠檬酸盐、赖氨酸、n，n-双(2-羟乙基)甘氨酸、n-2-羟乙基哌嗪-n'-2-羟基丙烷-3-磺酸的钠盐或钾盐、n-2-羟乙基哌嗪-n'-3-磺酸的钠盐或钾盐以及与上述任何化合物结合的酸、碱或盐中的一种。

8.根据权利要求2所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述预反应层中的表面活性剂为对辛基苯氧基聚氧乙烯醚、对壬基苯氧基聚氧乙烯醚、聚氧乙烯月桂醚、triton x-100和triton x-405中的一种；所述试剂层中的表面活性剂为triton x-100、triton x-102、triton x-165、triton x-305和triton x-405中的一种；所述扩散层中的表面活性剂为triton x-100、triton x-104、烷基酚聚氧乙烯醚和烷基醇酰胺中的一种。

9.根据权利要求1所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述无色染剂为二芳基咪唑染料、三芳基咪唑染料和联苯胺中的一种；所述辅助因子为黄素腺嘌呤二核苷酸、辅羧化酶中和对乙酰氨基酚的一种或多种。

10.根据权利要求1所述的谷草转氨酶检测用干式分析试剂片，其特征在于：所述上支持层、下支持层和中间支持层均为300nm-800nm波长光下的透光率在85％以上的透明塑料基材，包括聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、聚丙烯及聚乙烯中的一种，其厚度为80-250μm。