第118位酪氨酸磷酸化MLC2抗体的制备方法和使用方法

1.一种第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，包括抗原的制备、免疫、亲和层析柱的制备以及抗体的制备，所述第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体用于细胞免疫荧光和免疫组化实验，其特征在于，利用abdesigner软件对mlc2蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，分析内容包括亲水性、抗原性、表面可能性和柔性区在内的多个指数的评估，同时考虑包括氨基酸结构复杂程度，易氧化程度，合成难度，氨基酸类别和分布在内的多个因素，先确定mlc2的序列为kraggans(p)nvfsm；为保证后期多肽交联载体蛋白以及肽亲和纯化，在多肽链c末端增加一个半胱氨酸c，使多肽通过半胱氨酸与klh偶联，最终确定mlc2抗原表位多肽序列为kraggans(p)nvfsmc；

2.根据权利要求1所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述抗原的制备包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述a1中乳化合格的抗原的制备方法为：

4.根据权利要求3所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述亲和层析柱的制备包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述抗体的制备包括如下步骤：

6.根据权利要求1所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述c2中，基础免疫使用完全福氏佐剂，加强免疫使用不完全福氏佐剂。

7.根据权利要求1所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述c4中，转移前须核对乳化用注射器和注射用注射器及针头标签号是否一致。

8.根据权利要求1所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，所述klh-smcc溶液按照klh 100mg：水12.5ml：sulfo-smcc 25mg来配制。

9.根据权利要求3所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的制备方法，其特征在于，c3中，每次每只羊采集0.3－0.4ml全血。

10.一种权利要求1-9任意一项所述的第118位酪氨酸磷酸化mlc2抗体的使用方法，其特征在于，采用elsia法检测该抗体的磷酸化特异性，分别用磷酸化mlc2 tyr118多肽和非磷酸化mlc2多肽包被后进行识别比较。