一种抗逆的大肠杆菌及其构建方法与在丁二酸生产中的应用

1.一种抗逆的重组大肠杆菌，其特征在于，以在厌氧条件下发酵生产丁二酸的大肠杆菌为出发菌株，构建过量表达csga基因和异源表达psl(a-j)基因簇得到重组大肠杆菌。

2. 根据权利要求1所述的抗逆的重组大肠杆菌，其特征在于，所述出发菌株为大肠埃希氏菌(escherichia coli)ber208，保藏编号为cctccno：m2012351。

3. 根据权利要求1所述的抗逆的重组大肠杆菌，其特征在于，所述csga来源于大肠杆菌e. coli ber208，其核苷酸序列如seq id no.1所示；所述的psl(a-j)基因簇来源于铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa pa01，其核苷酸序列如seq id no.2所示。

4.权利要求1至3中任意一项所述重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)重组质粒构建方式如下：

6.权利要求1至5中任意一项所述重组大肠杆菌在产丁二酸中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，采用厌氧瓶或发酵罐一步厌氧发酵重组大肠杆菌生产丁二酸。

8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将重组大肠杆菌活化培养后，以5~15%v/v接种量接种到发酵培养基中，初始葡萄糖浓度为40~60 g/l，ph维持在5.5~7.0，35~39℃厌氧发酵，当od长至0.6~1.0左右时，加入2 g/l阿拉伯糖进行诱导，当葡萄糖消耗至0~10 g/l以下时，将葡萄糖浓度补至30~40 g/l，转速60~240 rpm，发酵时间为72~120 h。

9. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，重组大肠杆菌采用5 l发酵罐发酵，ph为5.5~7.0。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基为：0.12 g/l甜菜碱、2.6g/l (nh4)2hpo4、0.87 g/l nh4h2po4、0.15 g/l kcl、0.37 g/l mgso4·7h2o、2.4 g/lfecl3·6h2o、0.1 g/l h3bo3、0.3 g/l cocl2·6h2o、0.15 g/l cucl2·2h2o、0.5 g/lzncl2·4h2o、0.5 g/l namoo4·2h2o、0.5 g/l mncl2·4h2o，溶剂为水。