噻嗪酮半抗原、人工抗原及其制备和应用的制作方法

本申请涉及食品安全，特别涉及一种噻嗪酮半抗原、人工抗原及其制备和应用。

背景技术：

1、噻嗪酮(buprofezin)，又称扑虱灵、稻虱净，是一种抑制昆虫生长发育的新型选择性杀虫剂，具有很强的触杀和胃毒作用，且具有高活性、高选择性、长残效期的特点，可有效地防治水稻上的飞虱和叶蝉、茶、马铃薯上的叶蝉、柑桔、蔬菜上的粉虱，柑桔上的盾蚧和粉蚧，也能防治果树及茶树上的介壳虫等，常用于水稻和蔬菜的病虫害防治。但不规范使用会导致蔬菜、水果、茶叶等食品中的噻嗪酮超标，会对人们的健康造成损害。随着人们对食品安全的日益重视，蔬菜水果中药物残留的限量要求也日益严格。为保证消费者利益和食品安全，我国国家标准gb 2763-2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定了食品中噻嗪酮的最大残留限量。

2、目前，检测噻嗪酮农药残留的方法主要有气相色谱法(gc)、高效液相色谱法(hplc)、气相色谱质谱联用法(gc/ms)、液相色谱质谱联用技术(lc/ms)和酶联免疫吸附法(elisa)等。这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。其中，酶联免疫试剂盒：将已知的抗体或抗原结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性；测定时，将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应；用洗涤的方法分离抗原-抗体复合物和游离成分；最后加入酶的作用底物催化显色，根据已知量的残留物质标准曲线和待测样本的抑制率，再根据抑制率与残留物质浓度之间的半对数关系得到标准曲线，从而推算出待测物的浓度。酶联免疫每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗，实验灵活性低；检测精度不高，检测结果受很多因素的影响，可能会出现假阳性或假阴性结果；实验操作复杂，操作过程需要严格控制，容易受外界环境的影响而出现错误，且需要配套仪器进行数据分析，不同仪器之间存在差异。

3、与上述方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。而免疫化学法检测噻嗪酮的前提是需要具备针对噻嗪酮的抗体，其中获得高性能抗体取决于半抗原的结构设计，因此免疫半抗原的分子设计与合成是产生高性能抗体和建立小分子农药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。目前的关于噻嗪酮半抗原制备(专利申请号：cn202211388260.1)不是以噻嗪酮化合物作为原料进行的，而是通过一系列化合物一步一步进行合成的，不能保证原始结构的完整性。

4、有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

1、本申请一个或者多个实施例提供一种噻嗪酮半抗原、人工抗原及其制备和应用，包括如下技术方案：

2、本申请的一个或者多个实施例提供一种噻嗪酮半抗原，所述噻嗪酮半抗原的结构式如下所示：

3、

4、本申请的一个或者多个实施例提供所述的噻嗪酮半抗原的制备方法，所述制备方法包括在化合物ⅰ引入基团制备噻嗪酮半抗原的步骤。

5、本申请的一个或者多个实施例提供一种人工抗原，所述人工抗原包括载体蛋白以及偶联在所述载体蛋白上的所述的噻嗪酮半抗原；

6、可选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或/和卵清蛋白。

7、本申请的一个或者多个实施例提供所述的人工抗原的制备方法，所述制备方法包括：混合所述载体蛋白和所述噻嗪酮半抗原进行偶联反应，制备人工抗原。

8、本申请的一个或者多个实施例提供一种噻嗪酮多克隆抗体的制备方法，所述制备方法包括用免疫原免疫哺乳动物以及从接受免疫的哺乳动物的血清中分离噻嗪酮多克隆抗体的步骤；

9、其中，所述免疫原为所述的人工抗原；

10、可选地，所述哺乳动物包括兔形目动物。

11、本申请的一个或者多个实施例提供一种噻嗪酮多克隆抗体，所述噻嗪酮多克隆抗体通过所述的制备方法制备。

12、本申请的一个或者多个实施例提供一种噻嗪酮免疫检测试纸条，所述噻嗪酮免疫检测试纸条包括所述的噻嗪酮多克隆抗体和所述的人工抗原中的一种或者多种。

13、在本申请的一些实施方式中，所述噻嗪酮免疫检测试纸条包括所述的噻嗪酮多克隆抗体和所述的人工抗原。

14、在本申请的一些实施方式中，所述噻嗪酮免疫检测试纸条包括沿层析方向依次组装在底板上的样品垫、偶合物金垫、反应膜以及吸水垫，所述反应膜上设有检测线和质控线；

15、其中，所述偶合物金垫上包被有偶合物，所述偶合物包括偶合的所述噻嗪酮多克隆抗体和胶体金；质控线上包被质控蛋白，所述质控蛋白与所述噻嗪酮多克隆抗体特异性结合；所述检测线上包被所述人工抗原。

16、本申请的一个或者多个实施例提供一种所述的嗪酮免疫检测试纸条的制备方法，所述制备方法包括采用所述的噻嗪酮多克隆抗体和所述的人工抗原中的一种或者多种制备噻嗪酮免疫检测试纸条的步骤。

17、本申请的一个或者多个实施例提供一种噻嗪酮的检测方法，所述检测方法包括采用所述的噻嗪酮多克隆抗体或者所述的噻嗪酮免疫检测试纸条检测待测样本中噻嗪酮的步骤。

18、在本申请的一些实施方式中，所述待测样本为蔬菜样本、水果样本或者谷物样本。

19、本申请的一个或多个实施例细节在下面的描述中提出，本申请的其他特征、目的和优点将从说明书及其权利要求书变得明显。

1.一种噻嗪酮半抗原，其特征在于，所述噻嗪酮半抗原的结构式如下所示：

2.权利要求1所述的噻嗪酮半抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括在化合物ⅰ引入基团制备噻嗪酮半抗原的步骤。

3.一种人工抗原，其特征在于，所述人工抗原包括载体蛋白以及偶联在所述载体蛋白上的权利要求1所述的噻嗪酮半抗原；

4.权利要求3所述的人工抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：混合所述载体蛋白和所述噻嗪酮半抗原进行偶联反应，制备人工抗原。

5.一种噻嗪酮多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括用免疫原免疫哺乳动物以及从接受免疫的哺乳动物的血清中分离噻嗪酮多克隆抗体的步骤；

6.一种噻嗪酮多克隆抗体，其特征在于，所述噻嗪酮多克隆抗体通过权利要求5所述的制备方法制备。

7.一种噻嗪酮免疫检测试纸条，其特征在于，所述噻嗪酮免疫检测试纸条包括权利要求6所述的噻嗪酮多克隆抗体和权利要求3所述的人工抗原中的一种或者多种；

8.根据权利要求7所述的嗪酮免疫检测试纸条，其特征在于，所述噻嗪酮免疫检测试纸条包括沿层析方向依次组装在底板上的样品垫、偶合物金垫、反应膜以及吸水垫，所述反应膜上设有检测线和质控线；

9.权利要求7至8中任一项所述的嗪酮免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括采用权利要求6所述的噻嗪酮多克隆抗体和权利要求3所述的人工抗原中的一种或者多种制备噻嗪酮免疫检测试纸条的步骤。

10.一种噻嗪酮的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用权利要求6所述的噻嗪酮多克隆抗体、权利要求7或者8所述的噻嗪酮免疫检测试纸条检测待测样本中噻嗪酮的步骤；可选地，所述待测样本为蔬菜样本、水果样本或者谷物样本。