含雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液及培养方法与流程

本发明涉及生物，特别涉及一种含雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液及培养方法。

背景技术：

1、随着胚胎生物技术的不断进步，相较于体内自然成熟的卵子，通过离体卵巢获取未成熟卵子并进行体外成熟培养已成为一种重要手段。此方法不仅能够大量获得成熟卵子，还极大地促进了后续如体外受精、体细胞克隆、胚胎干细胞等领域的研究与生产应用。然而，当前水牛卵母细胞的体外成熟效率仍显不足，这一瓶颈问题严重制约了水牛胚胎生物工程技术的深入探索与广泛应用。

2、雷公藤红素，作为一种具有天然生物活性的核苷类抗生素，其多样的药理作用广受关注，包括抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎以及免疫调节等多重功效。尤为值得注意的是，雷公藤红素展现出了显著的抗氧化特性，能够有效对抗癌症新生血管生成，并在抗癌、肿瘤治疗以及脑神经领域的研究中表现出突出效果。

3、在卵子体外成熟的过程中，未成熟卵子自身的代谢活动以及体外操作环节均会产生大量的活性氧(ros)，进而引发氧化应激反应。这一现象不仅干扰卵子的正常减数分裂进程，还可能导致成熟阻滞，使得卵子细胞质与细胞核的成熟步伐不一致，最终削弱后续胚胎的发育潜能。因此，如何在卵子体外成熟过程中有效减轻氧化应激对卵子的损害，一直是该领域学者们致力于攻克的研究热点。尽管雷公藤红素在多个生物医学领域展现出巨大潜力，但其在卵子体外成熟过程中的应用却尚未见诸报道，这一空白领域亟待探索与开发。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种含雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液，以及应用该水牛卵母细胞体外成熟液的培养方法，能够有效提高水牛体外成熟卵子后续的发育能力及胚胎质量。

2、为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

3、一种含雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液，所述水牛卵母细胞体外成熟液包含雷公藤红素。

4、优选地，所述水牛卵母细胞体外成熟液包含雷公藤红素和溶剂，所述溶剂为含有nahco3、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、水牛发情牛血清、黄牛卵泡液、卵泡刺激素、促黄体生成素、半胱氨酸的tcm-199培养液。

5、优选地，所述雷公藤红素在溶剂中的摩尔浓度为1μm。

6、优选地，在溶剂中，所述nahco3的摩尔浓度为26.2mm，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸的摩尔浓度为5mm，所述水牛发情牛血清的质量百分比为10％，所述黄牛卵泡液的质量百分比为3％.，所述卵泡刺激素的浓度为0.5μg/ml，所述促黄体生成素的浓度为5μg/ml，所述半胱氨酸的浓度为10μg/ml。

7、本发明还提供了使用上述水牛卵母细胞体外成熟液培养水牛卵母细胞的培养方法，包括以下步骤：挑选出具有完整卵丘细胞包被的卵母细胞，先用洗卵液洗涤，再用水牛卵母细胞体外成熟液洗涤，然后将卵母细胞放入水牛卵母细胞体外成熟液中进行卵子体外成熟培养。

8、优选地，所述洗卵液包含雷公藤红素和溶剂，所述溶剂为含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、nahco3、牛血清白蛋白、青霉素和链霉素的tcm-199培养液。

9、优选地，洗卵液中的雷公藤红素在溶剂中的摩尔浓度为1μm。

10、优选地，在洗卵液的溶剂中，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸的摩尔浓度为20mm，所述nahco3的摩尔浓度为5mm，所述牛血清白蛋白的质量百分比为4％，所述青霉素的浓度为0.003g/ml，所述链霉素的浓度为0.005g/ml。

11、优选地，卵子体外成熟培养的条件为：在38.5℃、5％的co2的环境下培养22-24h。

12、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

13、本发明提供了一种含雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液，并配套提供了使用该成熟液进行水牛卵母细胞体外培养的具体方法。通过将此含有雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液应用于水牛卵母细胞的体外成熟过程中，相较于未添加雷公藤红素的传统水牛卵子体外成熟液，本发明能够显著提高水牛体外成熟卵子的质量及后续胚胎的发育能力。此外，雷公藤红素的成本适中，易于获取，这使得本发明在实际水牛胚胎体外生产中具有极高的推广价值和应用前景。

1.一种含雷公藤红素的水牛卵母细胞体外成熟液，其特征在于：所述水牛卵母细胞体外成熟液包含雷公藤红素。

2.按照权利要求1所述的水牛卵母细胞体外成熟液，其特征在于：所述水牛卵母细胞体外成熟液包含雷公藤红素和溶剂，所述溶剂为含有nahco3、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、水牛发情牛血清、黄牛卵泡液、卵泡刺激素、促黄体生成素、半胱氨酸的tcm-199培养液。

3.按照权利要求1所述的水牛卵母细胞体外成熟液，其特征在于：所述雷公藤红素在溶剂中的摩尔浓度为1μm。

4.按照权利要求1所述的水牛卵母细胞体外成熟液，其特征在于：在溶剂中，所述nahco3的摩尔浓度为26.2mm，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸的摩尔浓度为5mm，所述水牛发情牛血清的质量百分比为10％，所述黄牛卵泡液的质量百分比为3％.，所述卵泡刺激素的浓度为0.5μg/ml，所述促黄体生成素的浓度为5μg/ml，所述半胱氨酸的浓度为10μg/ml。

5.使用权利要求1的水牛卵母细胞体外成熟液培养水牛卵母细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：挑选出具有完整卵丘细胞包被的卵母细胞，先用洗卵液洗涤，再用水牛卵母细胞体外成熟液洗涤，然后将卵母细胞放入水牛卵母细胞体外成熟液中进行卵子体外成熟培养。

6.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述洗卵液包含雷公藤红素和溶剂，所述溶剂为含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、nahco3、牛血清白蛋白、青霉素和链霉素的tcm-199培养液。

7.按照权利要求6所述的培养方法，其特征在于：所述雷公藤红素在溶剂中的摩尔浓度为1μm。

8.按照权利要求6所述的培养方法，其特征在于：在溶剂中，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸的摩尔浓度为20mm，所述nahco3的摩尔浓度为5mm，所述牛血清白蛋白的质量百分比为4％，所述青霉素的浓度为0.003g/ml，所述链霉素的浓度为0.005g/ml。

9.按照权利要求5所述的培养方法，其特征在于，卵子体外成熟培养的条件为：在38.5℃、5％的co2的环境下培养22-24h。