一种具有睡眠改善作用的六肽DM6及其制备方法和应用

本发明涉及一种小分子肽及其制备方法和应用，具体涉及一种具有睡眠改善作用的六肽dm6及其制备方法和在辅助睡眠改善功能食品中的应用，属于生物。

背景技术：

1、睡眠对人体维持正常生理和功能具有重要作用，而睡眠障碍会导致代谢紊乱、情绪低落，影响人类健康。药物疗法可改善睡眠障碍，但会带来头昏、乏力、精神不振和药物依赖等副作用。同时，也无法满足现代社会因为熬夜导致的具有睡眠障碍亚健康人群的日常保健和未病先防需求。

2、牛奶具有安神助眠的观念深入人心，刘星雨等在文章《牛乳源促睡眠肽的体外抗氧化活性评价及对秀丽隐杆线虫的体内抗氧化作用》中评价了牛乳源促睡眠肽的作用。目前，已经从牛奶蛋白酶解液中分离获得了hqglpqevlnenllr、ykvpqleivpnsaeer、hpikhqglpqevln enllr、vpqleivpnsaeer、ylgyleqllr等系列促睡眠肽，但其它蛋白来源尤其是水产品来源的促睡眠肽较少有报道。

3、海参是传统的滋补佳品，海参多肽的制备和生物活性备受人们关注。已经发现并评估的海参多肽生物活性包括抗氧化、抗糖尿病、ace抑制、免疫调节、抗癌、抗疲劳、抗衰老、神经保护和微量金属螯合等。上述研究主要涉及利用海参体壁蛋白制备的酶解液，而利用海参花（海参肠、卵和内脏等的统称）制备酶解液的研究较少。已有研究表明，海参花酶解液具有ace抑制和降压活性，具有抗氧化、提高免疫力及肠道菌群调节作用，但海参花酶解液对睡眠的改善作用鲜有报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种筛选自海参花酶解液、具有睡眠改善作用、可应用于辅助睡眠改善功能食品中的小分子肽。

2、为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

3、一种具有睡眠改善作用的六肽dm6，所述六肽dm6的氨基酸序列为dtrgem，如序列表seq id no：3所示，具有睡眠改善作用。

4、前述具有睡眠改善作用的六肽dm6在辅助睡眠改善功能食品中的应用。

5、前述具有睡眠改善作用的六肽dm6的一种制备方法，采用固相合成法，具体的：

6、以fmoc保护的氨基酸为原料，以聚苯乙烯树脂为固相载体，采用fmoc固相合成策略进行固相合成。

7、前述具有睡眠改善作用的六肽dm6的另一种制备方法，采用酶解法，具体的：

8、（1）取海参花，加入海参花9倍体积的水，按照0.4％的酶底比加入复合蛋白酶进行酶解，酶解温度为55℃，ph值为8.0，酶解时间为2.5h，得到酶解产物，其中，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照1:1的质量比混合而成；

9、（2）酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液；

10、（3）冻干上述澄清的多肽酶解液，得到海参花肽样品，所述海参花肽样品中含有较多的六肽dm6。

11、本发明的有益之处在于：本发明从海参花酶解液中筛选获得的六肽dm6可以显著提高小鼠入睡率、显著延长小鼠睡眠时长、显著缩短小鼠入睡潜伏期，此外，还可以显著提高小鼠大脑内5-羟色胺和γ-氨基丁酸的含量、显著降低小鼠大脑内多巴胺含量，与已经报道的具有安眠抗焦虑作用的十肽ylgyleqllr相比，经六肽dm6处理的小鼠入睡率和睡眠时长显著增加、入睡潜伏期显著降低，脑组织中5-羟色胺和γ-氨基丁酸的含量显著增加、多巴胺含量显著降低，六肽dm6可应用于开发辅助睡眠改善的功能食品，改善睡眠作用好、毒副作用小、使用安全性高。

1.一种具有睡眠改善作用的六肽dm6，其特征在于，所述六肽dm6的氨基酸序列为dtrgem，如序列表seq id no：3所示，具有睡眠改善作用。

2.权利要求1所述具有睡眠改善作用的六肽dm6在辅助睡眠改善功能食品中的应用。

3.权利要求1所述具有睡眠改善作用的六肽dm6的制备方法，其特征在于，采用固相合成法，具体的：

4.权利要求1所述具有睡眠改善作用的六肽dm6的制备方法，其特征在于，采用酶解法，具体的：