用于茉莉酸生物合成的代谢改造细胞的制作方法

1.一种包含产生茉莉酸的代谢途径的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞相对于相应的亲本宿主细胞过表达具有12-氧代植物二烯酸还原酶(opr)活性的多肽，其中所述多肽包含与如seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组宿主细胞，其中使具有opr活性的多肽过表达已通过将表达具有opr活性的多肽的基因的天然启动子替换为具有比所述天然启动子更高的表达水平的启动子来提供。

3.根据权利要求2所述的重组宿主细胞，其中所述天然启动子被替换为小麦核腔菌(pyrenophora tritici-repentis)的toxa启动子或小麦核腔菌的toxb启动子。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组宿主细胞，其中具有opr活性的多肽的过表达已通过将编码具有opr活性的多肽的外源多核苷酸序列的至少一个拷贝重组引入宿主细胞内来提供。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞选自细菌、酵母、丝状真菌、蓝藻和植物细胞。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是属于选自以下的属的丝状真菌：毛色二孢属(lasiodiplodia)、根霉属(rhizopus)、梭链孢属(fusidium)、赤霉属(gibberella)、木霉属(trichoderma)、肉座菌属(hypocrea)、曲霉属(aspergillus)、镰刀菌属(fusarium)、青霉属(penicillium)、脉孢菌属(neurospora)、毛壳菌属(chaetomium)、枝顶孢属(acremonium)、小丛壳属(glomerella)、毁丝霉属(myceliophthora)、侧孢霉属(sporotrichum)、梭孢壳属(thielavia)、金孢子菌属(chrysosporium)、棒囊壳属(corynascus)、栉霉属(ctenomyces)、轮枝孢属(verticillium)、虫草属(cordyceps)、丛赤壳属(nectria)和巨座壳属(magnaporthe)。

7.根据权利要求6所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是lasiodiplodiairaniensis细胞。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞选自埃希氏菌属(escherichia)；沙门氏菌属(salmonella)；芽孢杆菌属(bacillus)；不动杆菌属(acinetobacter)；棒状杆菌属(corynebacterium)；甲基弯曲菌属(methylosinus)；甲基单胞菌属(methylomonas)；红球菌属(rhodococcus)；假单胞菌属(pseudomonas)；红细菌属(rhodobacter)；集胞藻属(synechocystis)；曲霉菌属(aspergillus)；节丛孢属(arthrobotlys)；短杆菌属(brevibacteria)；微杆菌属(microbacterium)；节杆菌属(arthrobacter)；柠檬酸杆菌属(citrobacter)；克雷伯氏菌属(klebsiella)；泛菌属(pantoea)；沙门氏菌属(salmonella)；棒状杆菌属(corynebacterium)和梭菌属(clostridium)。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是从选自以下的植物中分离的细胞：大豆；油菜；向日葵；棉花；玉米；烟草；苜蓿；小麦；大麦；燕麦；高粱；稻；西兰花；花椰菜；卷心菜；欧防风；甜瓜；胡萝卜；芹菜；欧芹；番茄；马铃薯；草莓；花生；葡萄；草籽作物；甜菜；甘蔗；豆类；豌豆；黑麦；亚麻；硬木树；软木树；牧草；拟南芥；稻(水稻(oryza sativa))；大麦(hordeum yulgare)；柳枝稷草(柳枝稷(panicum vigratum))；短柄草属(brachypodium spp.)；芸苔属(brassica spp.)；和海甘蓝(crambe abyssinica)。

10.一种用于生产茉莉酸的生物合成方法，其包括：

11.一种包含产生茉莉酸的代谢途径的重组宿主细胞，其中相对于相应的亲本宿主细胞，所述宿主细胞过表达编码具有12-氧代植物二烯酸还原酶(opr)活性的多肽的基因，其中所述基因包含与如seq id no:2中所示的多核苷酸序列具有至少90％同一性的多核苷酸序列。

12.根据权利要求11所述的重组宿主细胞，其中使编码具有12-氧代植物二烯酸还原酶(opr)活性的多肽的基因过表达已通过将表达具有opr活性的多肽的基因的天然启动子替换为具有比所述天然启动子更高的表达水平的启动子来提供。

13.根据权利要求12所述的重组宿主细胞，其中所述天然启动子被替换为小麦核腔菌的toxa启动子或小麦核腔菌的toxb启动子。

14.根据权利要求11所述的重组宿主细胞，其中使编码具有12-氧代植物二烯酸还原酶(opr)活性的多肽的基因过表达已通过将编码具有opr活性的多肽的外源序列的至少一个拷贝重组引入宿主细胞内来提供。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞选自细菌、酵母、丝状真菌、蓝藻和植物细胞。

16.根据权利要求11至14中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是属于选自以下的属的丝状真菌：毛色二孢属、根霉属、梭链孢属、赤霉属、木霉属、肉座菌属、曲霉属、镰刀菌属、青霉属、脉孢菌属、毛壳菌属、枝顶孢属、小丛壳属、毁丝霉属、侧孢霉属、梭孢壳属、金孢子菌属、棒囊壳属、栉霉属、轮枝孢属、虫草属、丛赤壳属和巨座壳属。

17.根据权利要求16所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是lasiodiplodiairaniensis细胞。

18.根据权利要求11至14中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞选自埃希氏菌属；沙门氏菌属；芽孢杆菌属；不动杆菌属；棒状杆菌属；甲基弯曲菌属；甲基单胞菌属；红球菌属；假单胞菌属；红细菌属；集胞藻属；曲霉菌属；节丛孢属；短杆菌属；微杆菌属；节杆菌属；柠檬酸杆菌属；克雷伯氏菌属；泛菌属；沙门氏菌属；棒状杆菌属和梭菌属。

19.根据权利要求11至14中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是从选自以下的植物中分离的细胞：大豆；油菜；向日葵；棉花；玉米；烟草；苜蓿；小麦；大麦；燕麦；高粱；稻；西兰花；花椰菜；卷心菜；欧防风；甜瓜；胡萝卜；芹菜；欧芹；番茄；马铃薯；草莓；花生；葡萄；草籽作物；甜菜；甘蔗；豆类；豌豆；黑麦；亚麻；硬木树；软木树；牧草；拟南芥；稻(水稻)；大麦；柳枝稷草(柳枝稷)；短柄草属；芸苔属；和海甘蓝。

20.一种用于生产茉莉酸的生物合成方法，所述方法包括：

21.一种用于生产具有12-氧代植物二烯酸还原酶(opr)活性的多肽的生物合成方法，所述方法包括：

22.一种载体，其包含与如seq id no:2中所示的多核苷酸序列具有至少90％同一性的多核苷酸序列。

23.根据权利要求22所述的载体，其进一步包含可操作地连接到与如seq id no:2中所示的多核苷酸序列具有至少90％同一性的多核苷酸序列的启动子，其中所述启动子具有的表达水平高于表达如seq id no:2中所示的多核苷酸序列的基因的天然启动子。

24.一种重组宿主细胞，其相对于相应的亲本宿主细胞过表达编码具有12-氧代植物二烯酸还原酶(opr)活性的多肽的基因，其中所述基因包含与如seq id no:3中所示的多核苷酸序列具有至少90％同一性的多核苷酸序列。

25.根据权利要求24所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞是遗传修饰的大肠杆菌细胞。

26.一种用于生产茉莉酸的生物合成方法，其包括：