一种共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法
技术特征:
1.一种共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,步骤(1)所述fe3o4@pda磁性纳米粒子与谷氨酸脱羧酶酶液的质量比为20:(1.2-2.4)。
3.根据权利要求1所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,步骤(1)和步骤(2)所述反应的ph采用磷酸盐缓冲液进行调节。
4.根据权利要求1所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,fe3o4@pda磁性纳米粒子、聚乙烯亚胺溶液和磷酸吡哆醛溶液的质量比为20:(10-30):(0.1-0.5)。
5.根据权利要求1所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,所述后处理为将混合物磁分离后,用去离子水洗涤。
6.根据权利要求1所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,步骤(1)所述fe3o4@pda磁性纳米粒子的制备方法如下:向盐酸多巴胺溶液中加入fe3o4纳米粒子,充分搅拌后,依次经洗涤、干燥、研磨,得到fe3o4@pda磁性纳米粒子。
7.根据权利要求6所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,其特征在于,fe3o4纳米粒子与盐酸多巴胺溶液的质量比为1:2。
8.采用权利要求1所述的共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法制备得到的固定化酶fe3o4@pda@pei@gad&plp在制备γ-氨基丁酸中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述固定化酶fe3o4@pda@pei@gad&plp的催化温度为37℃,ph为4.0。
技术总结
本发明涉及一种固定化方法,具体提供了一种共固定谷氨酸脱羧酶及其辅酶磷酸吡哆醛的方法,包括以下步骤:首先,向Fe3O4@PDA磁性纳米粒子中加入谷氨酸脱羧酶(GAD)酶液,调节反应pH为7‑9,经后处理,得到Fe3O4@PDA@GAD纳米粒子;然后,向Fe3O4@PDA@GAD纳米粒子中同时加入聚乙烯亚胺(PEI)溶液和磷酸吡哆醛溶液(PLP),调节反应pH为7‑10,振荡孵育后,经后处理,得到固定化酶Fe3O4@PDA@PEI@GAD&PLP。将本发明方法应用于γ‑氨基丁酸的制备,不仅避免了PLP流失,节约了成本,而且还能克服外源加入PLP导致的后续分离纯化困难的问题。
技术研发人员:张东浩,支高英,董永华
受保护的技术使用者:河北大学
技术研发日:
技术公布日:2024/11/26
文档序号 :
【 40123482 】
技术研发人员:张东浩,支高英,董永华
技术所有人:河北大学
备 注:该技术已申请专利,仅供学习研究,如用于商业用途,请联系技术所有人。
声 明 :此信息收集于网络,如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们,我们会在第一时间删除
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