一种生产胶原细胞株的构建及其生产方法与流程

1.一种生产胶原细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s1的具体方法如下：

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述保守序列基因包括procollagenn-endopeptidase、procollagen c-endopeptidase。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s2的具体方法如下：

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体质粒为pdw 265质粒。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述目的基因包括胶原目的基因、辅助酶系的基因。

7.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体pdw 265质粒含有谷氨酰胺合成酶基因及其表达的调控元件，其中启动子为pgk。

8.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体pdw265质粒中目的基因表达的启动子为ef-1α。

9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s3的具体方法如下：

10.一种如权利要求1-9任一项所述的构建方法构建得到的高通量筛选高产单克隆生产胶原细胞株。

11.一种胶原的生产方法，其特征在于，将权利要求8构建的高通量筛选高产单克隆生产胶原细胞株进行发酵表达，获得重组胶原蛋白。

12.根据权利要求11所述的生产方法，其特征在于，所述重组胶原蛋白为由三条a1链或两条a1链和一条a2链或三条a2链组成的其中任意一种或几种具有三螺旋结构的蛋白，所述a1链的氨基酸序列如seq id no.1；所述a2链的氨基酸序列如seq id no.2所示。