一种可自主分裂的人造细胞的制备方法

1.一种自主分裂的人造细胞模型的制备方法，其特征在于：所述方法为：

2.根据权利要求1所述的一种自主分裂的人造细胞的制备方法，其特征在于：步骤二中，所述固体培养基中，包括10g/lnacl，10g/l胰蛋白胨，5g/l酵母浸粉，15g/l琼脂；所述液体培养基中包括10g/lnacl，10g/l胰蛋白胨，5g/l酵母浸粉。

3.根据权利要求1所述的一种自主分裂的人造细胞模型的制备方法，其特征在于：所述步骤二具体为：将质粒转染进感受态大肠杆菌中，均匀涂布至固体培养基平板上；20小时后挑单菌落于300ml液体培养基中，37℃，200rpm过夜培养；将所得菌液以1：50的体积比加入液体培养基中进行扩大培养，37℃，200rpm培养至菌液od600值为0.6-0.8时，加入终浓度为0.5mmol的异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(iptg)和4mg/ml l-阿拉伯糖并将培养温度调整至25℃诱导10小时；8000rpm离心收集菌体，重悬菌体后用超声破碎仪破碎；所得破碎菌体于4℃，12000rpm离心后取上清液利用镍螯合亲和层析柱和尺寸凝胶排阻柱进行纯化，获得目的蛋白。

4.根据权利要求1～3任一项所述的一种自主分裂的人造细胞的制备方法，其特征在于：步骤二中，还包括以下操作：(1)绿色荧光探针fitc标记cdva蛋白：取50μl的1mg/mlfitc缓慢加入到1ml cdva蛋白中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部；将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育8h，每隔30min，将反应小管轻轻颠倒几次，加入5m的nh4cl至终浓度50mm，4℃终止反应2h；将反应混合物装入sephadex g-25色谱柱顶部，当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入pbs(ph 9)；向样品中继续加入pbs(ph 9)，完成柱纯化后，获得fitc-cdva的复合物；(2)红色荧光探针cy5-nhs标记cdvb蛋白：取1ml cdvb蛋白与10μl 10％(v/v)dmso配制的12mg/ml cy5-nhs酯混合，并在冰上孵育2小时；然后将50ml的1m tris-hci(ph8.0)添加到反应溶液中；将反应混合物上样到15mlsephadex g-25柱上，完成柱纯化后，获得cy5-cdvb的复合物。

5.根据权利要求1所述的一种自主分裂的人造细胞模型的制备方法，其特征在于：囊泡中ph为9，温度为37℃。