多重特异性结合剂及其用途的制作方法

1.一种多重特异性抗体或其片段，所述多重特异性抗体或其片段包含结合至cd47的第一结合结构域和结合至一个或多个不是cd47的靶标的一个或多个其他结合结构域，其中所述第一结合结构域包含：(a)重链可变(vh)区，其包含表1中所示的vh cdr1、vh cdr2和vhcdr3氨基酸序列；和(b)轻链可变(vl)区，其包含表1中所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

3.如权利要求1或2所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

4.一种具有结合至cd47的第一结合结构域的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

5.如权利要求4所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

6.如权利要求4或5所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

7.如权利要求5或6所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

8.一种具有结合至cd47的第一结合结构域的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含重链可变(vh)区，其包含：

9.如权利要求8所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

10.如权利要求8或9所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

11.如权利要求9或10所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

12.一种具有结合至cd47的第一结合结构域的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含轻链可变(vl)区，其包含：

13.如权利要求12所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

14.如权利要求12或13所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

15.如权利要求13或14所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

16.一种具有结合至cd47的第一结合结构域的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含来自指定为mab-c的抗体的所有三个重链互补决定区(cdr)或所有三个轻链cdr，所述抗体包含为seq id no:25的vh序列和为seq id no:26的vl序列。

17.如权利要求16所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

18.如权利要求16或17所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

19.如权利要求17或18所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含来自指定为mab-p的抗体的所有三个重链互补决定区(cdr)或所有三个轻链cdr，所述抗体包含为seq id no:46的vh序列和为seq id no:47的vl序列。

20.如权利要求16所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含来自指定为mab-c的抗体的所有三个重链cdr和/或所有三个轻链cdr。

21.如权利要求20所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

22.如权利要求20或21所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

23.如权利要求21或22所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含来自指定为mab-p的抗体的所有三个重链cdr和所有三个轻链cdr。

24.一种具有结合至cd47的第一结合结构域的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

25.一种多重特异性抗体或其片段，所述多重特异性抗体或其片段包含结合至cd47的第一结合结构域和结合至一个或多个不是cd47的靶标的一个或多个其他结合结构域，其中(a)所述多重特异性抗体或其片段结合至人cd47并且包含具有seq id no:25的氨基酸序列的重链可变区和具有seq id no:26的氨基酸序列的轻链可变区，或(b)所述多重特异性抗体或其片段与包含具有seq id no:25的氨基酸序列的重链可变区和具有seq id no:26的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争对人cd47的结合。

26.如权利要求24所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

27.如权利要求24-26中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

28.如权利要求26或27所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

29.如权利要求24所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含重链可变(vh)区，其包含表1中所示的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3氨基酸序列。

30.如权利要求29所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

31.如权利要求29或30所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

32.如权利要求30或31所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含重链可变(vh)区，其包含表2中所示的vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3氨基酸序列。

33.如权利要求24所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含轻链可变(vl)区，其包含表1中所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3氨基酸序列。

34.如权利要求33所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

35.如权利要求33或34所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

36.如权利要求34或35所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含轻链可变(vl)区，其包含表2中所示的vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3氨基酸序列。

37.如权利要求24所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

38.如权利要求37所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

39.如权利要求37或38所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

40.如权利要求37所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

41.如权利要求40所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

42.如权利要求40或41所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

43.如权利要求41或42所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

44.如权利要求37所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

45.如权利要求44所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

46.如权利要求44或45所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

47.如权利要求45或46所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

48.如权利要求37所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

49.如权利要求48所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

50.如权利要求48或49所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

51.如权利要求49或50所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

52.如权利要求37所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

53.如权利要求52所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

54.如权利要求52或53所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

55.如权利要求53或54所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

56.如权利要求51所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

57.如权利要求56所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

58.如权利要求56或57所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

59.如权利要求57或58所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

60.如权利要求37所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第一结合结构域包含：

61.如权利要求60所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述多重特异性抗体包含结合至pd-l1的第二结合结构域。

62.如权利要求60或61所述的多重特异性抗体或其片段，其是双重特异性抗体。

63.如权利要求61或62所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述第二结合结构域包含：

64.如权利要求24-63中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述vh区或vl区还包含人框架序列。

65.如权利要求64所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述vh区和vl区还包含人框架序列。

66.如权利要求24-63中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述vh区或vl区还包含框架1(fr1)、框架2(fr2)、框架3(fr3)和/或框架4(fr4)序列。

67.如权利要求66所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述vh区和vl区还包含框架1(fr1)、框架2(fr2)、框架3(fr3)和/或框架4(fr4)序列。

68.如权利要求1-67中任一项所述的多重特异性抗体或片段，其中所述抗体是重组抗体。

69.如权利要求1-68中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，其是fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、(scfv)2、单链抗体分子、双可变区抗体、单可变区抗体、线性抗体、v区或由抗体片段形成的多重特异性抗体。

70.一种多重特异性抗体，所述多重特异性抗体包含：(a)具有seq id no:48的氨基酸序列的第一多肽链、具有seq id no:49的氨基酸序列的第二多肽链、具有seq id no:50的氨基酸序列的第三多肽链和具有seq id no:51的氨基酸序列的第四多肽链，或(b)具有seqid no:52的氨基酸序列的第一多肽链、具有seq id no:49的氨基酸序列的第二多肽链、具有seq id no:53的氨基酸序列的第三多肽链和具有seq id no:51的氨基酸序列的第四多肽链。

71.如权利要求1-70中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，其缀合或重组融合至诊断剂、可检测剂或治疗剂。

72.如权利要求71所述的多重特异性抗体或其片段，其中所述治疗剂是化疗剂、细胞毒素或药物。

73.一种结合剂，其结合至与如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段基本相同的人cd47表位。

74.如权利要求73所述的结合剂，其是多重特异性抗体或其片段。

75.如权利要求73所述的结合剂，其包含非抗体蛋白骨架。

76.如权利要求75所述的结合剂，其中所述非抗体蛋白骨架包括纤维粘连蛋白骨架、抗运载蛋白、纤连蛋白、亲和体、darpin、菲诺体、affitin、affilin、高亲合性多聚体、富含半胱氨酸的打结素肽或工程化kunitz型抑制剂。

77.一种结合剂，所述结合剂作为如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段竞争对人cd47的结合。

78.如权利要求77所述的结合剂，其中所述结合剂是抗体或其片段。

79.一种或多种载体，所述一种或多种载体包含编码如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段的一个或多个多核苷酸。

80.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段和药学上可接受的载剂。

81.一种用于治疗受试者中癌症或肿瘤的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

82.一种用于减轻受试者中与癌症或肿瘤相关的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

83.一种用于减小具有肿瘤的受试者中肿瘤尺寸的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

84.一种用于增强具有肿瘤的受试者中肿瘤细胞去除的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

85.一种用于治疗受试者中吞噬细胞功能障碍疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

86.一种用于提高受试者中免疫细胞吞噬的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

87.如权利要求86所述的方法，其中所述免疫细胞是巨噬细胞、嗜中性白细胞、树突状细胞或者b淋巴细胞。

88.如权利要求86或87所述的方法，其中所述受试者被诊断患有癌症或肿瘤。

89.一种用于治疗受试者中t细胞功能障碍疾病、病症或病况的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

90.如权利要求89所述的方法，其中所述t细胞功能障碍疾病、病症或病况是肿瘤免疫。

91.一种用于增强受试者中t细胞功能的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-72中任一项所述的多重特异性抗体或其片段，或如权利要求80所述的药物组合物。

92.如权利要求91所述的方法，其中所述t细胞功能是细胞因子分泌。

93.如权利要求91所述的方法，其中所述t细胞功能是肿瘤细胞去除。

94.如权利要求91-93中任一项所述的方法，其中所述受试者被诊断患有癌症或肿瘤。

95.如权利要求81-94中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用与所述多重特异性抗体或其片段或所述药物组合物组合的一种或多种治疗剂。