一种用于培养血管化肝脏类器官的培养基及培养方法和应用
技术特征：
1.一种用于培养血管化肝脏类器官的培养基，其特征在于，由基础培养基和添加物组成，所述添加物由以下浓度的组分组成：1～20％(v/v)的胎牛血清、1～10mg/ml bsa、50～100u/ml青霉素、50～100μg/ml链霉素、0.125～0.25μg/ml的两性霉素b、1～20mm的nicotinamide、1～10mm的n-acetyl-l-cysteine、10～100μm的vitamin c、1～10μm的glutathione、1～20μg/ml的insulin、1～20μg/ml的transferrin、10～100nm的sodiumselenite、5～50ng/ml的血管内皮生长因子vegf、1～5μm的gsk3抑制剂和5～10μm的rock抑制剂；
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述gsk3抑制剂包括chir99021、sb415286或chir-98014，优选为chir99021。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，rock抑制剂包括y27632、sb-772077b或y-33075，优选为y27632。
4.一种血管化肝脏类器官的培养方法，其特征在于，使用权利要求1～3任一项所述的培养基在胞外基质基底上培养成体肝脏细胞，得到血管化肝脏类器官。
5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述成体肝脏细胞的制备方法包括取成体肝脏组织进行循环消化得到成体肝脏细胞；
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述消化液由基础培养基、i型胶原酶、dna酶、bsa、和rock抑制剂组成；
7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，所述培养时间为至少4d；
8.权利要求1～3任一项所述的培养基或权利要求4～7任一项所述的培养方法在筛选纤维化药物中的应用。
9.一种筛选抗纤维化药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤c包括若纤维化组织微环境下的血管化肝脏类器官中纤维化标志物基因的表达量相对于加入待筛选药物前显著降低，且正常组织微环境血管化肝脏类器中微血管标志物基因与肝脏上皮细胞标志物基因的表达量相对于加入待筛选药物前无显著降低，则待筛选药物为抗纤维化药物；
技术总结
本发明提供了一种用于培养血管化肝脏类器官的培养基及培养方法和应用，涉及生物医学技术领域，由基础培养基和添加物组成，所述添加物中加入BSA有利于微血管和肝脏上皮细胞的共培养，抗生素浓度减半之后，有利于微血管和肝脏上皮细胞的共培养。可用于培养从成体肝脏组织分离获得的细胞，这些细胞可以在二维培养皿中形成多层细胞结构即二维血管化肝脏类器官，培养过程中通过胞外基质作用获得具有不同硬度微环境的血管化肝脏类器官，以模拟肝脏纤维化过程中组织变硬的不同阶段。解决了现有技术中血管化肝脏类器官的培养技术难以准确模拟成体肝脏组织，且无法模拟肝脏纤维化过程中组织变硬的环境导致无法应用于纤维化研究和药物筛选的技术问题。
技术研发人员：王栋,李菁,马磊
受保护的技术使用者：青岛大学
技术研发日：
技术公布日：2024/11/14
技术研发人员：王栋,李菁,马磊
技术所有人：青岛大学
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