一种测定大米样品中14种有机氯农药的方法及其应用与流程

本发明涉及大米农残检测领域，具体地说，涉及一种测定大米样品中14种有机氯农药的方法及其应用。

背景技术：

1、有机氯农药(ocps)作为一种高效广谱杀虫剂，由于它们防治面广，药效好，因而在防治作物、森林和牲畜的害虫上有较多的应用,但是有机氯农药由于分子结构和化学性质比较稳定，毒性大，在环境中不易降解，且可以随环境迁移、容易生物积累等特性能够长期并大量残留于土壤及直接污染作物,然后通过生物富集和食物链作用进入人体和动物体，能在心、肝、肾等组织中蓄积，长期食用农药残留超标的农副产品，可能引起人和动物的慢性中毒，导致疾病的发生，诱发癌症，对人体和环境造成极大的不可逆转的危害，甚至影响到下一代。

2、有机氯农药自20世纪初合成以来，曾大量用于农业生产，因其具有强毒性和生物累积性，部分有机氯农药相继被禁用于蔬菜等作物上，但时至今日仍可从各种环境介质中检出该类物质,属于持久性有机污染物(pops)。随着这些农药残毒的发现以及人们的食品安全意识的提高，食品安全已成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题，粮食作物安全问题越来越被重视，大米中的农药残留检测受到广泛关注。因此，针对大米中有机氯农药残留进行有效检测，变得非常迫切。建立大米中多种类有机氯农药残留的分析方法可为大米中的有机氯农药残留监测和风险评估提供依据。

3、大米中有机氯的残留多在痕量水平，有机氯类农药同分异构体种类较多，各同分异构的毒性不一。因而，高灵敏度的检测方法、有效的富集净化方法、多种类有机氯农药残留的同时检测是检测的重点和难点。近年来，农残快检技术，常见的有化学速测法、免疫分析法、酶抑制法和光谱分析等。虽然方法操作简单、快速成本低，但定性粗糙、准确度低，灵敏度低，使用局限性，且易受物质干扰，对农药的适用范围窄。这就给食品安全监管部门对农产品的监督工作带来了许多不便。目前，大米中农药残留分析的前处理技术主要有索氏提取法、固相萃取、液液萃取,基于索氏提取法提取时间长、消耗大量的溶剂、必须考虑被测物的稳定性且含水量过高的样品不宜作为分析对象。液-液萃取法不需要昂贵的设备和特殊仪器，操作简便，但是常用到大体积的溶剂，而在振荡分配过程中且要控制溶剂体积，费时费力，容易引起误差。固相萃取法操作简单，适用面广；但有机溶剂的使用量较大，且不适于大批量样品的前处理。因此，建立省时高效、有机溶剂消耗少、快速和简单的样品前处理新技术已成为检测分析领域的研究热点。针对以上问题，本发明使用quechers法作为样品前处理方法相比于传统的样品前处理方法，具有操作简单、重复性好，时间短、回收率高、消耗溶剂少等优点，大大提高了分析效率。并结合气相色谱质谱联用技术作为分析检测手段，建立一种同时快速测定大米中14种有机氯农药的新方法，具有分析农药范围广、分析速度快、结果更可靠等优点，能很好的适用于有机氯农药残留的分析检测。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种测定大米样品中14种有机氯农药的方法及其应用，该方法系统的改进了有机氯农药检测分离条件、quechers吸附剂的配比、提取溶剂的选择，简单快捷，减少了实验时间，提高了工作效率，有效分离同分异构体，方法精确度和灵敏度高，重现性好。实现了大米中14种痕量有机氯农药的定性及定量分析。并对该发明的应用效果进行评估，大米样品中14种有机氯农药精确度和灵敏度高，重现性好。

2、本发明所述的14种农残包含α-六六六(α-hch)、β-六六六(β-hch)、γ-六六六(γ-hch)、δ-六六六(δ-hch)、六氯苯(hexachlorobenzene)、七氯(heptachlor)、艾氏剂(aldrin)、三氯杀螨醇(dicofol)、反式氯丹(trans-chlordane)、顺式氯丹、(cis-chlordane)、p,p’-滴滴伊(p,p’-dde)、p,p’-滴滴滴(p,p’-ddd)、o,p’-滴滴涕(o,p’-ddt)、p,p’-滴滴涕(p,p’-ddt)。

3、本发明采用如下技术方案实现：

4、一种测定大米样品中14种有机氯农药的方法

5、1)按照四分取样法选用大米，称取粉碎后的大米样品10.0g于50ml离心管中；

6、2)加入10ml丙酮溶剂和0.5g氯化钠，充分混匀涡旋1min，超声10min；

7、3)提取液以8000r·min-1转速离心3min，提取液待净化；

8、4)取2ml待净化的样品上清液置于装有50mgc18、25mgpsa和300mg无水硫酸镁的15ml离心管中，涡旋振荡1min；

9、5)再以8000r·min-1转速离心3min，取上清液过0.22μm有机相微孔滤膜到样品瓶中，待气相色谱质谱联用仪检测，外标法定量；

10、气相色谱仪分析条件：

11、thermo fisher isq1300气相色谱质谱联用仪；色谱柱:db-1701(30m×0.25mm，0.25μm)；进样口温度：250℃；传输线接口温度为250℃；进样方式：不分流进样1.0min；溶剂延迟4min；载气：高纯氦气；恒流模式；流速：1.0ml/min；进样量：1.0μl；程序升温条件如下：

12、 升温速率(℃/min) 温度(℃) 保持时间(min) 时间(min) 0 50 1 1 20 250 0 11 10 280 2 16

13、质谱仪条件：

14、离子源：电子轰击源(ei)离子源；

15、溶剂延迟时间为：4min；

16、电离能量：70ev；

17、离子源温度：280℃；

18、电子镜头+电压：15.0v，电子镜头-电压：-75.0v，推斥极电压：3.0v,透镜1电压设置：-50.0v,镜头2+电压设置:100.0v,透镜2-电压设置：-5.7v,透镜3电压设置：-35.0v；

19、扫描方式：选择离子扫描模式(sim)；

20、保留时间和选择扫描监测离子信息见表1

21、表1.目标化合物的保留时间和sim离子参数

22、

23、

24、本发明的另一个目的是提供一种大米样品中14种有机氯农药的方法在监测大米样品中14种有机氯农药残留量方面的应用。

25、本发明的有益效果：

26、(1)建立采用改进的quechers-gc-ms同时快速测定大米中14种有机氯农药的方法，大米样品中14中有机氯农药用丙酮提取后，上清液经优化的c18、psa和无水硫酸镁吸附剂比例进行净化，采用db-1701色谱柱分离，选择离子扫描模式(sim)检测，外标法定量。14中有机氯农药在0.06-250ng/ml浓度范围内线性关系良好，相关系数大于0.999。其中方法检出限为0.02-0.05μg/kg，定量限为0.06-0.15μg/kg。加标回收率在80％～116％之间，相对标准偏差均小于8.60％。满足国家标准对对检测方法的技术要求。

27、(2)本发明通过优化色谱柱类型及色谱柱升温程序，将单个样品的上机检测时间缩短至16min，不高于现有文献中同时检测14中有机氯农药上机检测时间，甚至低于部分文献中检测14中有机氯农药上机检测时间，能将14种有机氯类农药(包含同分异构体)均能有效分离，且色谱峰峰形良好。采用气相色谱质谱联用仪选择离子扫描模式(sim)进行检测，通过优化了在大米样品基质中14种有机氯农药的定性、定量离子选择，使得背景干扰少，检出限低，定性准确度高。

28、(3)本发明前处理操作简单高效，利用优化的quechers方法对大米进行净化，现行gb 5009.146-2008标准植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定法采用液液萃取净化方法，操作复杂，单个样品的前处理时间长且不易批量处理样品，有机试剂使用量大，对实验人员和环境危害较大。本发明净化为改进的quechers方法，操作简单易上手，单个样品的前处理时间可控制在18分钟，吸附剂与离心管可与厂家定制配套使用，若进行大批量样品检测时，前处理优势将更加明显。

29、(4)本发明不经浓缩直接上机测定，克服14种有机氯农药在浓缩转移过程中易损失问题，方法回收率高。相比gb 5009.146-2008标准部分有机氯农药中检出限为0.1-1.0μg/kg，本方法检出限为0.02-0.05μg/kg，检出限不高于现有文献报道水平，甚至低于部分文献检出限水平。

30、(5)采用本发明对大米中14种有机氯农药进行检测，可为大米中的14种有机氯农药残留监测和风险评估提供可靠数据支撑，对保障人类健康具有重要意义。