一种香菇退化菌株的检测方法

本发明涉及食用菌菌种繁育和菌种质量检测，具体而言，涉及一种香菇退化菌株的检测方法。

背景技术：

1、香菇是我国栽培规模最大的食用菌，在食用菌产业发展中具有重要地位。在香菇栽培生产中，菌种质量是核心问题，优良的菌种是香菇高产稳产的关键要素。然而在实际生产中，香菇菌种由于长期无性繁殖常常出现菌种退化现象，会导致子实体产量和品质降低，严重的甚至绝收。当前香菇产业亟需能够在菌种扩繁阶段检测出退化菌株的方法，以实现大生产前淘汰退化菌株的目的，保障香菇大规模栽培生产的稳定性。

2、在香菇菌种质量以及退化菌株检测方面，国内外研究报道较少，目前还没有开发出香菇退化菌株的检测方法。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种香菇退化菌株的检测方法以实现大生产前淘汰退化菌株的目标，保障香菇大规模栽培生产的稳定性。

2、本发明是这样实现的：

3、本发明提供了一种香菇退化菌株的检测方法，采用如下至少一种方法进行：

4、(1)取待测香菇的菌丝体与氯化硝基四氮唑蓝、nadph接触，反应后加入甘油，取反应后的菌丝体进行显微观察；

5、(2)取待测香菇的菌丝体与中性红溶液接触，洗涤后显微观察。

6、本发明具有以下有益效果：

7、本发明针对香菇菌种无性扩繁过程中引起菌种退化现象，开发出用于检测香菇菌株退化的方法，以实现大生产前淘汰退化菌株的目标。发明人发现，菌种退化或菌株退化现象发生后，菌丝体内部积累的有害物质会增加，尤其是活性氧的增加。其中一种检测方法中，氯化硝基四氮唑蓝(nbt)能与活性氧(ros)反应，ros能够还原nbt形成蓝色的甲唑啉产物或深蓝色物质。为了增强测定的灵敏度，本发明添加电子供体，这些电子供体可以通过向ros提供电子来促进nbt的还原反应，导致形成更强烈的蓝色物质。通过镜检，若菌丝体被染色为蓝色或深蓝色，则判断该菌丝体已发生退化，由此为退化菌株的筛选提供了快捷的检测方法。在另一种检测方法中，中性红能够对细胞内酸性物质及细胞器，如溶酶体、自噬泡进行染色。菌株发生退化时，菌丝细胞内会产生大量酸性囊泡，通过中性红染色，细胞内圆球状囊泡被染成红色或深红色，而正常菌株观察不到这种染色现象。

8、综上，本发明利用菌丝染色和显微检测技术，首次开发出用于检测香菇一级种、二级种、三级种菌株退化的方法，本发明的提出保障了香菇大规模栽培生产的稳定性。

1.一种香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，采用如下至少一种方法进行：

2.根据权利要求1所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述香菇的菌株退化判断方法为：

3.根据权利要求1所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述香菇的菌株退化判断方法为：

4.根据权利要求1所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述待测香菇的菌丝体、氯化硝基四氮唑蓝、所述电子供体的接触比例为：0.01g～0.03g：0.6-1.8mm：0.3mm；

5.根据权利要求4所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述待测香菇的菌丝体与氯化硝基四氮唑蓝、电子供体的接触反应时间为15-25min。

6.根据权利要求4所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述待测香菇的菌丝体与电子供体、氯化硝基四氮唑蓝接触反应后，加入甘油；

7.根据权利要求6所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述甘油的添加量占所述氯化硝基四氮唑蓝体积的40％-60％。

8.根据权利要求1所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述待测香菇的菌丝体与中性红溶液的接触比例为：0.01g～0.03g：0.02mg～0.03mg。

9.根据权利要求1所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述待测香菇的菌丝体与中性红溶液的接触时间为20-30min。

10.根据权利要求9所述的香菇退化菌株的检测方法，其特征在于，所述洗涤采用的洗涤剂为水、pbs或ph为7-7.5的tris缓冲液。