乳源外泌体的提取和鉴定方法
技术特征:
1.一种乳源外泌体的鉴定方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的鉴定方法,其特征在于,所述乳源外泌体样品通过如下方法获取:以动物乳为原料,去除乳脂后任选地通过凝乳酶处理或等电点沉淀处理去除至少部分酪蛋白,随后通过超速离心处理沉淀乳源外泌体,并重悬于液体介质中,即得。
3.根据权利要求1或2所述的鉴定方法,其特征在于,所述荧光标记染料选自chromeop503染料、pkh67染料、bodipy fl l-cystine染料、alexa fluor488染料和fitc染料中的任意一种。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的鉴定方法,其特征在于,所述荧光标记染料的工作浓度为0.005~0.05mg/ml。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的鉴定方法,其特征在于,所述琼脂糖凝胶的浓度为0.3g/100ml~2g/100ml。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的鉴定方法,其特征在于,所述琼脂糖凝胶电泳中使用的电泳缓冲液的ph值为7~12。
7.根据权利要求1~6中任一项所述的鉴定方法,其特征在于,所述琼脂糖凝胶电泳的电压为80~100v,电泳的时间为20~40min。
8.一种乳源外泌体的提取方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
9.根据权利要求8所述的提取方法,其特征在于,所述乳源外泌体样品、所述荧光标记染料、所述荧光标记染料的工作浓度、所述琼脂糖凝胶的浓度、所述琼脂糖凝胶电泳中使用的电泳缓冲液的ph值、所述琼脂糖凝胶电泳的电压和时间分别各自独立的如权利要求1~7中任一项所述的鉴定方法中所定义。
10.根据权利要求8或9所述的提取方法,其特征在于,在所述乳源外泌体提取的步骤中,所述电泳的电压为90~110v,电泳的时间为50~70min。
技术总结
本发明属于生物技术领域,具体涉及乳源外泌体的提取和鉴定方法,更具体而言,涉及一种基于琼脂糖凝胶电泳的乳源外泌体的提取和鉴定方法。本发明提供的鉴定方法包括样品处理的步骤、对照品处理的步骤、琼脂糖凝胶电泳的步骤和检测的步骤;本发明提供的提取方法包括样品处理的步骤、琼脂糖凝胶电泳的步骤和乳源外泌体提取的步骤。本发明使用荧光染料标记乳外泌体,通过琼脂糖凝胶电泳时乳外泌体和乳蛋白等其他乳成分的迁移率差异,实现外泌体的快速分离鉴定,同时借助凝胶切割回收,可实现乳外泌体的分离提取。
技术研发人员:徐秦峰,孙娜娜,程健博,黄珍,谢阳,孙建国,陆思宇
受保护的技术使用者:陕西科技大学
技术研发日:
技术公布日:2024/11/18
文档序号 :
【 40051833 】
技术研发人员:徐秦峰,孙娜娜,程健博,黄珍,谢阳,孙建国,陆思宇
技术所有人:陕西科技大学
备 注:该技术已申请专利,仅供学习研究,如用于商业用途,请联系技术所有人。
声 明 :此信息收集于网络,如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们,我们会在第一时间删除
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